user560
2012-03-22 07:13:52 UTC
Comment pourrais-je procéder pour amplifier un transcrit de gène (ARNm) à partir de tissu animal dont on en sait peu sur le génome? Dans certaines applications, j'ai utilisé la PCR de transcriptase inverse pour amplifier tous les transcrits d'ARNm à partir de cellules cultivées, mais cela exigeait que je connaisse la séquence à amplifier par PCR.
Comment procéder sans connaître le gène ou transcipt?
Connaissez-vous la fonction du gène? Quel est le but de votre expérience?
Je sais que c'est une hormone endocrinienne, et je peux établir des parallèles avec l'endocrinologie humaine, mais au-delà de cela, je n'en sais pas grand-chose (et il ne semble pas y avoir grand-chose dans la littérature non plus). Le but est vraiment de voir comment les orthologues de mammifères sont conservés par rapport aux lézards.
Avoir la séquence hormonale aide un peu. Bien que cela ne soit pas entièrement impartial, vous pouvez essayer d'enrichir votre séquence en amplifiant à partir d'une région conservée.
Ouais, bobthejoe a raison: il suffit de rechercher dans google ['clonage basé sur l'homologie'] (http://www.google.com/cse?cx=004738989115247203233%3A09r2ltc-nlc&ie=UTF-8&q=luciferase#gsc.tab=0&gsc .q =% 20gene% 20clonage basé sur l'homologie)
@bobthejoe - merci, je vais rechercher le clonage basé sur l'homologie. Je soupçonne qu'il y a une bonne quantité (50%) de conservation entre les humains et les lézards, donc je vais voir si cette voie peut donner un résultat significatif.