Question:
Dommages causés par le pipetage aux cellules
bobthejoe
2012-06-13 01:02:53 UTC
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Je suis curieux de savoir combien de dégâts peuvent être infligés par la contrainte de cisaillement par pipetage. Je sais que les seringues utilisées pour l'injection de cellules souches peuvent causer beaucoup de dégâts. Cependant, dans quelle mesure cela se produit-il avec les pointes de pipettes P20 et P200? Naturellement, le module de cisaillement des cellules bactériennes est sensiblement différent de celui des cellules cancéreuses, qui sera différent de celui des cellules souches.

Il est peut-être possible de comparer P200 avec P20 à bas prix (quelqu'un est-il prêt pour une expérience participative sur HeLa ou E. coli?), Mais je soupçonne que votre question réelle demande des nombres absolus, et il est donc presque impossible de répondre. Il est difficile d'envisager une méthode sans pipette pour délivrer des cellules 100% viables, et encore plus difficile de penser à des alternatives (mesurer l'ADN libre après pipetage? Comment cela peut-il être converti en nombre de cellules?). User137 suggère quelque chose de décent, mais qui manque encore d'absolu. En l'absence de preuves, toutes les réponses que vous recevrez seront forcément des "avis d'expert" spéculatifs.
Sept réponses:
rhill45
2014-08-30 11:36:43 UTC
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C'est une excellente question, j'entraîne des gens à cultiver des cellules depuis environ 12 ans et les étudiants ont du mal à comprendre cela et à apprécier l'importance, etc.

Ce que les cellules ressentent habituellement pendant le pipetage est analogue à une foule de personnes essayant de passer par la porte d'un immeuble. Le cisaillement pendant le pipetage est certainement une préoccupation légitime en culture cellulaire. Vous remarquerez son effet négatif sur la viabilité le plus explicitement lors du pipetage des cellules dans un milieu de congélation (contenant du DMSO) après un dégel. Jusqu'à ce que leur concentration de DMSO baisse leurs membranes sont plus faibles & plus fluide. C'est pourquoi vous pipetez les cellules congelées goutte à goutte dans le milieu frais, pour être particulièrement doux à ce stade.

Les cellules procaryotes telles que les cellules TOP10 mentionnées ci-dessus sont traitées avec du chlorure de calcium et du glycérol qui contient essentiellement le même effet sur leurs parois et membranes. Par conséquent, le pipetage doit être effectué délicatement après la décongélation de ces cellules.

Cela étant dit, si vous comparez la sensibilité des cellules procaryotes et eucaryotes au cisaillement, les cellules eucaryotes sont profondément plus sensibles.

Pour les personnes utilisant des bactéries compétentes pour le sous-clonage et autres utilisations de routine, tuer un petit pourcentage de vos cellules n'est pas si important. Cependant, si vous utilisez la transformation pour générer des bibliothèques d'ADNc, il est très important que vous disposiez d'un titre représentant suffisamment le transcriptome dont la bibliothèque est composée.

Dans ces cas, l'utilisation d'une cellule plus compétente, le respect des températures correctes et la minimisation du pipetage sont essentiels. C'est pourquoi on apprend à beaucoup de gens à faire tourbillonner l'ADN avec les cellules compétentes, plutôt que l'alternative plus dure: le pipetage de haut en bas.

Les quatre facteurs les plus importants qui contribuent au cisaillement cellulaire sont, et en formulaire de commande le plus au moins contributif:

  1. Diamètre de l'alésage dans la pointe de pipette, plus petit est le plus grand cisaillement.
  2. Vitesse à laquelle la suspension passe par l'ouverture de la pointe. Le plus rapide est le plus dommageable.
  3. Taille et rigidité de la cellule. Les cellules plus grandes sont plus sujettes aux dommages. Les cellules avec une paroi en mureine sont moins sujettes aux dommages.
  4. Concentration de cellules. Les cultures qui sont plus concentrées sont plus sujettes aux dommages.

Parce que la composition de la cellule elle-même est si influente sur la quantité de dégâts, et à cause de l'énorme variété de cellules; concevoir une expérience représentative pour évaluer les dommages serait très difficile et laborieux.

Enfin, la variété des astuces et des sériologiques est également énorme. Cependant, si l'on essayait d'évaluer cela, cela pourrait être fait:

Choisissez une variété représentative de lignées cellulaires, choisissez une variété représentative de pipettes. On voudrait probablement utiliser une pipette robotique pour pouvoir évaluer les vitesses et les pressions attribuées de manière incrémentielle. Regardez les différentes concentrations de culture, les phases de la courbe de croissance, le temps entre le pipetage et l'analyse, la distance entre le fluide sortant et la culture, etc.

Je pense qu'une méthode d'analyse très réussie consisterait à utiliser de l'iodure de propidium et FACS.

Après votre expérience qui vous coûtera beaucoup de temps et $, je pense que vous trouverez des règles de bon sens: gardez le pipetage au minimum et utilisez des astuces plus larges chaque fois que possible.

Ceci est une bonne explication mais ne donne pas en fait une représentation numérique du pourcentage de décès pour aucun dommage causé par la palettisation.
Bon point Ici, je vais reformuler car il semble recevoir un certain nombre de votes
Le matériau avec lequel la pipette est fabriquée n'affectera-t-il pas également la cellule? J'imagine que les membranes cellulaires ont une affinité différente pour différents matériaux
@CRags certes oui mais vraiment minime.
Artem
2012-06-13 01:11:37 UTC
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C'est une expérience facile à faire. Prenez vos cellules aliquotez-les dans 10 tubes de microcentrifugeuse et pipetez chaque suspension de plus en plus de fois, colorez au bleu trypan et comptez.

Les facteurs les plus importants seront le type de pipette que vous utilisez; Je m'attendrais à ce qu'un p1000 cause plus de dégâts qu'un p200 puis un p20 en raison de la vitesse du fluide. Le facteur le plus important sera également la compétence du scientifique, si vous pipetez lentement, cela devrait diminuer le stress plutôt que de pipeter rapidement.

D'après mon expérience, cela dépend du type de pipette et de la compétence de l'opérateur . La seule façon de répondre à cela pour vous est de l'essayer empiriquement.

Eh bien, cela sera fortement basé sur l'erreur de l'opérateur. De façon anecdotique, j'ai entendu dire que c'était l'inverse; un P1000 causerait moins de dégâts qu'un P20.
Artem a raison: la seule façon de dire est empirique. Le P1000 influencera les dommages de la cellule probablement en raison de la vitesse. En revanche, les P200 et P20 pourraient causer des dommages en raison du trou de pointe étroit.
Essayez-le et publiez les résultats. Je pense que la compétence des opérateurs est le facteur le plus important.
Nous avions l'habitude d'utiliser une pompe péristaltique pour plaquer les cellules HepG2 dans 384 et 1536 plaques. Lorsque nous sommes passés aux hépatocytes primaires, la pompe en a tué trop et a dû passer au placage manuel avec une pipette à 8 canaux. Le type de cellule est donc très important.
Non, ça ne va pas mesurer le bon ... juste non
Ben
2012-06-13 01:13:26 UTC
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De manière anecdotique, je n'ai observé aucune mort cellulaire lors du pipetage de E. coli DH5alpha ou TOP10, mais en tant que cellules compétentes, le mélange par pipetage de haut en bas est déconseillé en raison de la paroi cellulaire compromise.

Bon point Il est assez difficile de tuer les bactéries mécaniquement, les cellules compétentes sont cependant plus sensibles et l'inquiétude survient lors de la création d'une bibliothèque d'ADNc, car vous avez besoin d'un nombre très représentatif de colonies
C'est une belle observation.
user1357
2014-08-31 08:07:45 UTC
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Cette question serait mieux servie en physique ou en chimie. Je ne pense pas que nous ayons une ingénierie générique où la dynamique des fluides pourrait être décrite dans une méthode différente de la physique, mais si nous le faisions, il faudrait également y répondre.

En effet, la pression osmotique ou liquide en elle-même provoquerait des modifications, éventuellement des dommages à la cellule Puis d'autres réactions eexothermiques et endothermiques aux produits chimiques dues à la force de l'impact comme une brûlure chimique ou par friction.

Je suis sûr que les autres exigences de conservation de l'énergie que j'ai ignorées à moitié dangereusement.

J'ai trouvé cet article intéressant qui se concentre sur la contrainte de cisaillement en général.

Le pipetage provoque une contrainte de cisaillement et une élévation de la protéine kinase / jun kinase phosphorylée activée par le stress dans les embryons préimplantatoires.

Xie Y1, Wang F, Puscheck EE, Rappolee DA.

La contrainte de cisaillement à 1,2 dynes / cm (2) induit une phosphorylation de protéine kinase / jun kinase activée par le stress qui précède et provoque l'apoptose chez les embryons (Xie et al., 2006b, Biol Reprod). Le pipetage des embryons est nécessaire pour de nombreux protocoles, de la fécondation in vitro à la collecte d'embryons avant l'analyse de l'expression génique par des puces à ADN. Nous avons cherché à déterminer si le pipetage régulait à la hausse MAPK8 / 9 phosphorylé (anciennement connu sous le nom de protéine kinase activée par le stress / jun kinase / SAPK / JNK1, 2). Nous avons constaté que MAPK8 / 9 phosphorylé, un marqueur de l'activation de MAPK8 / 9, est régulé à la hausse de manière dose-dépendante par pipetage. Alors que les embryons avec la zone pellucide retirée étaient plus sensibles à la létalité induite par le stress médiée par une force de cisaillement de 1,2 dynes / cm (2), le MAPK8 / 9 phosphorylé a été induit à des nombres inférieurs de triturations de pipettes dans les embryons éclos à E4,5. Les embryons E4.5 étaient plus sensibles à l'induction de MAPK8 / 9 que les embryons non éclos à E2.5 ou E3.5. Les embryons E3.5 ont également montré une induction dose-dépendante de pipetage de la protéine FOS (anciennement connue sous le nom de c-fos), un marqueur de contrainte de cisaillement dans de nombreux types de cellules. Les MAPK8 / 9 phosphorylés mesurés dans des embryons ex vivo de E1.5 à E4.5 ont été exprimés à de faibles niveaux. Les embryons qui avaient été pipetés suffisamment pour induire MAPK8 / 9 phosphorylé et FOS avaient le même nombre de cellules que les embryons non traités 24 heures plus tard. Cela suggère que la phosphorylation rapide de MAPK8 / 9 due à une contrainte de cisaillement transitoire ne modifie pas les résultats biologiques négatifs à long terme. Mais, il est possible que des techniques nécessitant de multiples événements de manipulation induisent MAPK8 / 9 et provoquent des résultats biologiques ou que d'autres résultats biologiques soient affectés par de faibles quantités de contrainte de cisaillement transitoire. Cette étude suggère que la manipulation des embryons avant la mesure expérimentale des phosphoprotéines de transduction du signal, des protéines et de l'ARNm doit être effectuée avec précaution. En effet, il est probable que la contrainte de cisaillement puisse provoquer des changements transitoires rapides dans des centaines de protéines et d'ARNm.

@rhill45 ouais, la question portait sur les dommages causés par la contrainte de cisaillement cellulaire pendant le pipetage..L'autre réponse semblait acheter le seul dommage provenant de la pointe pal ... mais je voulais souligner que la contrainte de cisaillement du liquide pipeté est également susceptible d'endommager / détruire la cellule.
@rhill45 également si vous allez apprendre le php, vous devriez investir du temps dans asp car de nombreuses industries voient entre les deux.
inf3rno
2014-10-23 06:49:27 UTC
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La contrainte de cisaillement $ \ tau $ dans ces petites tailles est généralement mesurée en dyne / cm2 ou N / m2 = Pa. Les équations entre elles: $ 1dyn / cm ^ 2 = 10 ^ {- 5} N / cm ^ 2 = 0,1N / m ^ 2 = 0,1Pa $.

Quels types de dommages les zygotes peuvent-ils subir en pipetant?

En utilisant la microscopie électronique à balayage, nous avons trouvé des trous ouverts sur le surface des œufs lysés, indiquant l'échec de la membrane plasmique à refermer après micro-injection. Aucun trou n'a été observé dans les œufs non lysés, mais beaucoup d'entre eux présentaient des altérations de la membrane suggérant des perforations cicatrisées.

Même une petite contrainte de cisaillement de 1,2 dyn / cm2 induit l'apoptose en pipetant des zygotes. Ainsi, les zygotes ont leur niveau de contrainte de cisaillement critique de 1,2 dyn / cm2 et le pipetage implique des forces supérieures à 1,2 dyn / cm2.

La contrainte de cisaillement à 1,2 dynes / cm2 induit une protéine kinase / jun kinase activée par la contrainte phosphorylation qui précède et provoque l'apoptose chez les embryons (Xie et al., 2006b, Biol Reprod). Le pipetage des embryons est nécessaire pour de nombreux protocoles, de la fécondation in vitro à la collecte d'embryons avant l'analyse de l'expression génique par des puces à ADN. Nous avons cherché à déterminer si le pipetage régulait à la hausse MAPK8 / 9 phosphorylé (anciennement connu sous le nom de protéine kinase activée par le stress / jun kinase / SAPK / JNK1, 2). Nous avons constaté que MAPK8 / 9 phosphorylé, un marqueur de l'activation de MAPK8 / 9, est régulé à la hausse de manière dose-dépendante par pipetage.

Le niveau critique de contrainte de cisaillement se situe entre 0,01 et 1000 dyn / cm2 par les cellules animales selon le type de cellule et l'espèce. (Je pense que la moyenne est d'environ 50 dyn / cm2, mais il est très difficile de faire la différence entre les articles mentionnant les niveaux de cisaillement critiques et les niveaux de cisaillement les plus létaux, de sorte que la fourchette et la moyenne pourraient être plus faibles.) La constante de mort (1 / h ) augmente de façon exponentielle en augmentant la contrainte de cisaillement.

Un appareil pour l'étude détaillée de l'influence de la contrainte de cisaillement sur les cellules BHK adhérentes a été développé. Des forces de cisaillement comprises entre 0,0 et 2,5 N m − 2 ont été étudiées. L'influence sur la viabilité cellulaire, la morphologie cellulaire, la lyse cellulaire et la taille cellulaire a été déterminée. L'augmentation des forces de cisaillement ainsi que l'augmentation de la durée d'exposition ont entraîné des changements croissants dans la morphologie cellulaire et la mort cellulaire. Un «niveau de contrainte de cisaillement critique» a été déterminé.

Les dommages liés à la contrainte de cisaillement à un hybridome de souris ont été examinés par Abu-Reesh et Kargi dans des conditions laminaires et turbulentes dans un viscosimètre Searle à cylindre coaxial. Les cellules ont été exposées à des niveaux de contrainte de cisaillement de 5 à 100 N / m2 pendant 0,5 à 3,0 h. À une contrainte de cisaillement et un temps d'exposition donnés, le cisaillement turbulent était beaucoup plus dommageable que le cisaillement laminaire comme cela a également été rapporté dans le passé pour les protozoaires et les cellules végétales. Dans des conditions turbulentes, des dommages se sont produits lorsque la contrainte de cisaillement dépassait 5 N / m2. L'activité respiratoire des cellules a été endommagée plus tôt que la membrane cellulaire, impliquant ainsi la transmission du signal de stress à l'intérieur de la cellule. Les dommages cellulaires ont suivi une cinétique de premier ordre à la fois dans des environnements laminaires et turbulents. Pour des niveaux de contrainte de cisaillement turbulents de 5 à 30 N / m2, la constante de taux de mortalité (kd) a augmenté de façon exponentielle avec l'augmentation du niveau de contrainte; les valeurs de kd variaient de 0,1 à 1,0 1 / h.

Les cultures endothéliales sous-confluentes exposées en continu à 1 à 5 dynes / cm2 de cisaillement prolifèrent à un taux comparable à celle des cultures statiques et atteignent la même densité de saturation (≃ 1,0–1,5 × 105 cellules / cm2). Lorsqu'elles sont exposées à une contrainte de cisaillement laminaire de 5 à 10 dynes / cm2, les monocouches confluentes subissent un changement dépendant du temps de la forme des cellules de polygonale à ellipsoïdale et deviennent uniformément orientées avec l'écoulement. La régénération des «plaies» linéaires dans une monocouche confluente semble être influencée par la direction de la force appliquée. Des études préliminaires indiquent que certaines fonctions des cellules endothéliales, y compris l'endocytose fluide, l'assemblage cytosquelettique et les propriétés de surface non thrombogènes, sont également sensibles à la contrainte de cisaillement. Ces observations suggèrent que les forces mécaniques des fluides peuvent influencer directement la structure et la fonction des cellules endothéliales.

Une contrainte de cisaillement supérieure à 0,25 dyne / cm (2) a entraîné une perte dramatique de podocytes mais pas de cellules épithéliales tubulaires proximales (cellules LLC-PK (1)) après 20 h.

Une série de précautions des études ont été faites sur les lésions sanguines dans un viscosimètre rotatif. Une attention particulière a été portée sur les effets de l'interaction surface solide, de la force centrifuge, de l'interaction de l'interface air, du mélange de couches cisaillées et non cisaillées, de l'interaction cellule-cellule et du chauffage visqueux. Les résultats montrent qu'il existe une contrainte de cisaillement seuil, 1500 dynes / cm2, au-dessus de laquelle les dommages cellulaires importants sont directement dus à la contrainte de cisaillement, et les différents effets secondaires listés ci-dessus sont négligeables.

Le seuil de contrainte de cisaillement de certains dinoflagellés (microalgues) est encore plus bas que celui des érythrocytes (0,029 N / m2). Par exemple, un niveau de contrainte de cisaillement laminaire continu de seulement 0,0044 N / m2 (équivalent à un taux de cisaillement de 2,2 1 / s) s'est avéré mortel pour les polyèdres dinoflagellés Gonyaulax.

D'autres types de cellules ne sont pas nécessaires aussi sensibles que les cellules animales et ils ne réagissent pas nécessairement avec l'apoptose (environ 10 dyn / cm2) pour se cisailler stress, vous devez donc utiliser des forces nécrotiques (environ 5000 dyn / cm2) pour les détruire:

  type de cellule taille sensibilité au cisaillement cellules microbiennes 1-10 μm faible granules / agrégats microbiens jusqu'à 1 cm cellules végétales modérées 100 μm modérées / highplant cellules agrégées jusqu'à 1-2 cm cellules highanimales 20 μm cellules highanimales sur microporteurs 80-200 μm cellules très hautes champignons 2-10 μm modérée / élevée  

Les résultats montrent que les ovaires de hamster chinois et les cellules rénales embryonnaires humaines entreront dans la voie apoptotique lorsqu'elles seront soumises à de faibles niveaux de stress hydrodynamique (environ 2,0 Pa) dans un flux oscillant extensif. En revanche, la mort nécrotique prévaut lorsque les cellules sont exposées à contraintes hydrodynamiques autour de 1,0 Pa en écoulement de cisaillement simple ou autour de 500 Pa en écoulement extensif.

La sensibilité au cisaillement n'est pas déterminée uniquement par le type de cellule et l'espèce, il existe de nombreux autres facteurs impliqués:

  • type de cellule et espèce
  • composition et épaisseur de la paroi cellulaire lorsqu'elle est présente
  • taille et morphologie de la cellule
  • l'intensité et la nature de la contrainte de cisaillement, qu'elle soit turbulente ou laminaire, ou associée à des interfaces (par exemple lors de la montée et de la rupture des bulles)
  • histoire de croissance, à la fois à court terme (ex: famine) et à long terme d'adaptation
  • milieu de croissance (oligo-éléments, vitamines, sources de carbone et d'azote)
  • taux de croissance
  • stade de croissance
  • type et concentration des agents de protection contre le cisaillement si présents

Les cellules peuvent être très sensibles au cisaillement contrainte causée par un écoulement turbulent, mais pas si sensible à la contrainte de cisaillement causé par un écoulement laminaire.

Sur la base de mesures de viscométrie à écoulement laminaire, un niveau critique de contrainte de cisaillement de 80-200 N / m2 a été suggéré pour les cellules de Morindata citrifolia.

... tandis que pour Daucus carota, un niveau de contrainte de cisaillement de 50 N / m2 a été associé à des dommages cellulaires. Dans une autre étude, les cellules de carotte dans un viscosimètre Couette à flux laminaire ont perdu la capacité de croître et de se diviser dans la plage de contraintes de cisaillement de 0,5 à 100 N / m2. L'activité enzymatique intracellulaire était altérée à des niveaux de contrainte de cisaillement supérieurs à 3000 N / m2, mais une lyse significative ne se produisait pas avant un niveau de contrainte de cisaillement de 10 000 N / m2 appliqué sur une période prolongée (> 1h).

En revanche au comportement en flux laminaire, les cellules étaient assez sensibles à l'agitation turbulente de la roue. Des vitesses de pointe de la turbine d'environ 1,1 m / s ont lysé une proportion significative des cellules en 40 minutes.

Les dommages causés par la bulle sont sévères (1000 cellules par une seule bulle de 3,5 mm) en raison de l'adhérence des cellules à l'interface de la bulle et des fortes forces impliquées (> 1000 dyn / cm2 par les bioréacteurs agités). L'adhérence et donc les dommages peuvent être réduits avec des tensioactifs.

Il est proposé que lorsque les cellules sont soit attachées, soit très proches, d'une bulle de rupture, les forces hydrodynamiques associées à la rupture sont suffisantes pour tuer les cellules.

Toutes les expériences ont été menées avec des cellules d'insectes Spodoptera frugiperda (SF-9), en milieu TNM-FH et SFML, avec et sans Pluronic F-68. Des expériences indiquent qu'environ 1050 cellules sont tuées par rupture de bulle unique de 3,5 mm dans du milieu TNM-FH et approximativement le même nombre de cellules mortes sont présentes dans le jet ascendant. On a également observé que la concentration de cellules dans ce jet ascendant est plus élevée que la suspension cellulaire en milieu TNM-FH sans Pluronic F-68 d'un facteur deux. On pense que cette concentration plus élevée est le résultat de l'adhérence des cellules à l'interface de la bulle. Ces cellules sont entraînées dans le jet ascendant pendant le processus de rupture de la bulle. Enfin, il est suggéré qu'une fine couche autour de la bulle contenant ces cellules absorbées est le «volume de destruction hypothétique» présenté par d'autres chercheurs.

Pour une lignée d'hybridomes, a rapporté que l'exposition à la contrainte de cisaillement laminaire (208 N / m2) dans un écoulement non aéré dans un viscosimètre à cône et plaque a conduit à une perte substantielle du nombre de cellules et de la viabilité en 20 min. À une exposition constante de 180 s, augmentation de la contrainte de cisaillement sur 100-350 N / m2 perturbation cellulaire linéairement améliorée, avec> 90% des cellules détruites à un niveau de stress de 350 N / m2. Les niveaux de contrainte de cisaillement associés à la rupture des bulles à la surface d'un bioréacteur peuvent aller de plus de 100 à 300 N / m2. Ces valeurs sont remarquablement cohérentes avec les taux de cisaillement qui ont endommagé les hybridomes dans les expériences d'écoulement laminaire non aéré.

Les pipettes à trous plus petits causent plus de dégâts.

Nous avons également examiné les aspects de la procédure de transfert de gène qui pourraient influencer la survie tels que la taille des pipettes d'injection et leur conicité par rapport au diamètre du zygote, la toxicité possible de le milieu d'injection, le moment de l'injection et le retrait immédiat ou retardé de la pipette. Les seuls facteurs qui ont significativement affecté la viabilité cellulaire étaient la taille et la conicité de la pipette, et le moment de l'injection par rapport au premier clivage. Cela suggère que la viabilité du zygote est inversement corrélée à la taille du trou produit par la pipette d'injection et que les dommages à la membrane sont moins réparés avec succès car l'œuf fécondé se prépare à la division.

Il est difficile de trouver quoi que ce soit sur le niveau de contrainte de cisaillement par pipetage. Il peut certainement être supérieur à 1 dyn / cm2. Il a une courte durée (au plus quelques secondes). Je pense que les facteurs suivants peuvent influencer les niveaux de contrainte de cisaillement par pipetage:

Il y a probablement plus de facteurs impliqués mais je ne suis pas un expert en pipetage. ;-) Je suis d'accord avec les autres, cela dépend sûrement des compétences personnelles par ex. un amateur peut créer d'énormes bulles par pipetage, ce qui peut tuer beaucoup de cellules par formation et perturbation ...

Je suis d'accord avec Artem pour dire qu'il s'agit d'une expérience à faire surtout si le résultat est important pour vous. Ce dont vous avez besoin pour créer un modèle sur les dommages de la pipette, ce sont les niveaux de contrainte de cisaillement par pipetage et les niveaux de contrainte de cisaillement critiques des cellules. Je pense qu'il est difficile de concevoir et d'expérimenter dans lequel vous pouvez mesurer les niveaux de contrainte de cisaillement dans vos pipettes et il n'y a pas de modèle d'écoulement pour le pipetage pour autant que je sache, donc cela peut être un bon sujet pour une thèse ou un travail de diplôme.

Adam McInnes
2017-01-10 07:53:25 UTC
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Je sais que c'est un fil de deux ans, mais je pensais que je le publierais de toute façon au cas où quelqu'un d'autre chercherait cette réponse comme je l'étais ce soir. Cet article cité ci-dessous ne traite pas spécifiquement des pointes de pipette par rapport aux aiguilles, mais il discute de la différence entre les effets de la conicité et des aiguilles cylindriques sur les dommages cellulaires. Malheureusement, les calculs dans l'article me dépassent un peu (je suis médecin, pas ingénieur, et ils n'ont pas couvert ce sujet à la faculté de médecine), mais ils ont constaté qu'avec des aiguilles cylindriques, il en résulte environ 5 fois la quantité de mort cellulaire par rapport à une aiguille effilée à n'importe quel débit donné, et environ 6-8x la quantité de cellules endommagées. Cela était probablement dû en partie à la nécessité de pressions plus élevées pour augmenter les débits dans les aiguilles cylindriques par rapport aux aiguilles coniques et aux variations de cisaillement dues aux géométries. Bien qu'une aiguille effilée ne soit pas identique à une pointe de pipette en plastique, les géométries sont comparables.

Biotechnol Prog. 2011 novembre-décembre; 27 (6): 1777-84. Effet de la géométrie de l'aiguille sur le débit et les dommages cellulaires dans le processus de biofabrication basé sur la distribution. Li M1, Tian X, Schreyer DJ, Chen X.

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/btpr.679/full

maca
2017-08-11 18:27:47 UTC
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J'ai un exemple biologique réel. configuration de l'expérience simplifiée: les cellules B purifiées ex vivo subissent 3 lavages dans du PBS (spin et remise en suspension), puis elles sont incubées in vitro pendant 24 heures et analysées par cytométrie en flux en utilisant Acqua Zombie et PI pour l'exclusion des cellules mortes. Expérience 1: pipetage après lavages avec une pointe de 1 ml Expérience 2: pipetage après lavages avec une pipette de 10 ml

Survie cellulaire analysée par cytométrie en flux: Expérience 1: 9,96% Expérience 2: 43,9%



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