Question:
Pourquoi les lignées cellulaires sont-elles gelées en phase vapeur?
rhill45
2015-02-08 09:34:10 UTC
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Pour la plupart des lignées cellulaires que j'ai rencontrées, l'ATCC recommande de les stocker dans la phase vapeur de l'azote liquide. Je suppose que cela signifie n'importe quel endroit au-dessus du niveau de liquide dans le réservoir de stockage d'azote. Quelle est la raison pour ça? Dans quelles conditions / exigences conserverait-on des cellules / tissus immergés dans un liquide?

Un répondre:
Chris
2015-02-08 16:21:37 UTC
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Le stockage lui-même peut se faire à la fois dans le liquide et également en phase vapeur dans l'azote liquide. Les deux ont leurs avantages et leurs inconvénients. D'après mon expérience, il y a deux raisons principales pour lesquelles le stockage en phase vapeur (bien qu'il puisse y avoir des fluctuations de température lorsque l'azote diminue) est recommandé.

Premièrement, vous évitez les contaminations croisées de vos lignées cellulaires avec des mycoplasmes (et d’éventuels autres contaminants) qui peuvent être transférés dans la phase d’azote liquide puis dans vos autres cultures. Ce n'est pas un danger théorique, mais plutôt réel. Voir les articles dans la référence ci-dessous.

Ensuite, l'azote liquide pénètre dans vos cryotubes (ce qui est également la cause de contaminations). Si vous utilisez des tubes qui ne sont pas explicitement conçus pour ce type de stockage (ce qui n'est pas un problème pour le stockage en phase vapeur), l'azote liquide qui l'a fait dans le tube se dilatera lors de la décongélation et pourra faire exploser votre tube. Cela peut provoquer des blessures. Pour plus de détails, voir ici et ici.

Références:

  1. Risque de contamination du matériel génétique pendant cryoconservation et crypto-banque dans les unités de FIV.
  2. Contamination microbienne des embryons et du sperme lors de la mise en banque à long terme dans l'azote liquide
Je ne pense pas qu'il puisse y avoir de problème de contamination avec les mycoplasmes, mais c'est possible avec les virus.
Cela peut arriver. Les mycoplasmes peuvent survivre dans l'azote liquide pendant de très longues périodes et provoquer des contaminations. J'y suis allé, j'ai vu ça. Nous avons dû jeter tout un ensemble de cellules.
Alors, comment les membranes cellulaires / protéines virales gèrent-elles l'azote liquide? Je suppose que l'azote est un solvant non polaire, mais serait-il suffisant pour perturber une bicouche phospholipidique?
Il est en effet non polaire. Mais cela ne perturbera pas les couches memnrane, car celles-ci ont des groupes polaires vers l'extérieur (les queues non polaires sont dirigées vers l'intérieur de la membrane). Sinon, nous ne pourrions y stocker aucune cellule. De plus, ces cellules survivent comme les autres cellules y sont congelées. Comme ils sont plus simples qu'une cellule eucaryote, ils ont plus de chances de survivre.
A propos des problèmes myco, j'ai perdu près d'un millier d'échantillons comme celui-ci. J'aurais aimé qu'ils aient rendu ces dewers capables de contenir plus de n2. Chris bonne réponse ici.


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